卤代醇脱卤素酶HheC的固定化
时间:2019-11-18
卤代醇脱卤素酶HheC的固定化
孙恒飞
[摘要]工业酶在工业生产中发挥着重要作用。
Haloalcohol dehalogenase HheC是从农杆菌放线菌AD1中提取的一种新型工业酶。现有的研究表明,这种酶对工业和制药应用具有??很大的希望,并且可以将有毒有机卤化物催化为一体。一些手性药物中间体,例如(R)-4-氰基-3-丁酸酯。
然而,HheC在游离状态下的物理化学性质不稳定,对酸和碱等环境变化,温度和盐浓度敏感,对变性非常敏感。
使用固定化酶技术进行酶研究以提高酶的性能和范围可以大大增加工业酶应用的范围。
本文通过物理吸附,物理插入和共价化学键合方法研究了HheC的固定化,并找到了适合HheC的固定化方法。
首先,使用活化硅胶作为固定化的吸附介质。研究表明,该方法简单,根据以前的报道具有较高的成功率,但不适用于HheC的固定,酶蛋白的活性在载体中大量丧失。。应用海藻酸钙法。该车整合了酶和细胞,并优化了经典设计,以满足实际的实验需求。制备的固定化细胞可成功提高约120倍的热稳定性,固定化后2-氯1-苯乙醇的对映选择性仍然良好,但这样制备固定车辆不太稳定。载体的良好吸水性促进了载体的膨胀和破裂,这导致环境中内部酶分子的释放。
然后研究共价键合方法并用环氧官能载体Relizyme 403S固定。通过对传统固定化方案的研究,优化和改进,可以简化制备固定化酶的复杂步骤并改进制备的固定化酶。共价结合克服了嵌入载体的缺陷。研究表明,共价载体在水溶液和空气中极其坚硬和稳定,这使得HheCSe在工业中得到广泛应用。
[学位授予单位]:电子科技大学[年]:硕士学位[颁发年份]:2014年[分类编号]:Q814。
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